Techniques modernes de diagnostic paraclinique non invasif du déficit en cellules souches limbiques : comparaison, développement, recommandations

Optimiser le diagnostic paraclinique predictif et non invasif du deficit en cellules souches limbiques (DCSL) : in vitro apres empreinte cytologique (EC) par la recherche immunohistochimique (IH) de marqueurs pertinents et par reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), technique de haute sensibilite ; in vivo par microscopie confocale (MCIV). Materiel et Methodes: La preuve diagnostique de DCSL est la presence de cellules conjonctivales au sein de la cornee, la persistance de cellules corneennes signant un DCSL partiel. L'EC a ete standardisee. La specificite de chacun des marqueurs corneens ou conjonctivaux selectionnes a ete recherchee sur des tissus normaux avant d'aborder une etude prospective monocentrique, sur 22 yeux de 18 patients cliniquement suspects de DCSL. Les cellules epitheliales de la cornee centrale etaient recueillies par EC puis transferees sur lame. L'expression des marqueurs de differentiation conjonctivale (K7, K13, K19, MUC5AC) et corneenne (K12) a ete recherchee par IH sur les 22 EC et celle de la MUC5AC par RT-PCR sur 4 d'entre elles. Enfin, la cornee et le limbe de 7 patients ont etes analyses par MCIV. La concordance entre les techniques est evaluee. Conclusion: Ces techniques complementaires dependent de l'equipement du service et de l'accessibilite a un laboratoire competent. Un organigramme decisionnel a ete etabli pour permettre de faire un diagnostic fiable de DCSL, les examens paracliniques etant inutiles dans certains cas. La recherche IH de keratines conjonctivales K7/K13 et/ou la detection de MUC5AC par RT-PCR sur cellules corneennes recueillies par EC sont des techniques diagnostiques de haute valeur scientifique, tandis que l'IH K12/MUC5AC doit etre abandonnee pour manque de sensibilite et celle de K3/K19 pour manque de specificite. La MCIV, quand elle est realisable, est une technique hautement sensible qui permet une quantification du degre de severite de la maladie avec une forte concordance avec les autres examens