Vpliv keratinskega citoskeleta na celični odgovor, povzročen z ionizirajočim sevanjem in citokini receptorjev smrti

Keratini so proteini intermediarnih filamentov, ki so izraženi v vseh tipih epitelijskih celic. Keratinske mutacije povzrocajo stevilne hude dedne bolezni krhkosti kože. Med njimi je tudi bulozna epidermoliza simpleks (EBS), povezana z mutacijami v keratinih 5 in 14. Mutirani keratini tvorijo deformiran citoskelet intermediarnih filamentov in s tem spravijo keratinocite EBS v stresno stanje. Slednje povzroci stalno aktivacijo signalnih poti kinaze MAP in spremeni izražanje genov pri mnogih drugih proteinih, med katerimi imajo stevilni vlogo pri celicni adheziji. Odkrili so, da imajo bolniki s hudo obliko EBS-DM povecano skupno tveganje za karcinom bazalnih celic, ki sovpada z izpostavljenostjo soncu, ni pa nujno, da se na teh obmocjih pojavlja mehurjenje kože. Za proucevanje vplivov keratinskih mutacij smo najprej uporabili celicne linije, odvzete iz bolnikov z EBS v osnovnih celicnih testih, in pokazali, da lahko njihova razlicna genetska ozadja, ne glede na mutacijo v keratinih, najbolj vplivajo na odziv celic na razlicne tretmaje. Natancna opredelitev pogojev gojenja celicne kulture (sestava gojisca, stevilo nasajenih celic in stevilo gojenja v kulturi) je zato bistvenega pomena za primerjavo. Primerjali smo keratinocite EBS s kontrolnimi celicnimi linijami in testirali njihovo obnasanje pri dveh razlicnih stresorjih, ki lahko povzrocita celicno smrt: ionizirajoce sevanje in citokini receptorjev smrti (TNF-a in TRAIL). Pridobljeni podatki so pokazali, da prihaja do precejsnjih razlik med odzivom keratinocitov EBS in normalnih celic. Ugotovili smo, da se je pri keratinocitih EBS po izpostavitvi ionizirajocemu sevanju spremenilo izražanje stevilnih proteinov, kot so: pChk2, pH2AX, pBRCA1 in pATM, ki so vsi vkljuceni v odgovor celice na poskodbo DNA. Najbolj izstopajoce je bilo znižanje izražanja proteina pChk2 pri keratinocitih EBS že pri normalnih pogojih gojenja, saj se lahko zaradi tega celica povsem drugace obnasa pri kontrolni tocki G2/M celicnega cikla. Keratinociti EBS so bili tudi manj obcutljivi, v primerjavi z normalnimi celicami za tretma s TNF-a in TRAIL, kar pa je lahko povezano z ugotovljenim povisanjem izražanja dveh preživetvenih proteinov, Bcl-2 in FLIP. Vse te spremembe lahko predstavljajo zascitni mehanizem, ki pomaga pri preživetju keratinocitov EBS, hkrati pa lahko dovoli se mocno poskodovanim celicam, da se izognejo kontrolnim tockam in apoptozi. To bi lahko predstavljalo prispevajoci faktor pri transformaciji celic.