杂色鲍 HSP 90基因启动子的功能分析

为探索启动子在热休克蛋白90表达调控中的作用，本研究在课题组已有杂色鲍 HSP 90基因cDNA的基础上，通过Genome walking、Tail-PCR和常规PCR等技术克隆获得该基因的5′调控区序列。在翻译起始位点(ATG)和第一外显子(长度94 bp)之间有一个809 bp的内含子，第一外显子之前的5′调控区共2800 bp，从预测的转录起始位点(A)起，共2811 bp。在转录起始位点(A)上游–30 bp处存在TATA box。潜在的转录因子结合位点包括ATF、TBP、Sp1、Oct-1、C/EBPalpha、NF-1、NF-κappaB、GATA-1、Sox-2等。CpG岛预测软件分析其含1个CpG岛，长度为131 bp。实验构建了8个启动子缺失片段的萤火虫荧光素酶表达载体，通过瞬时转染293T细胞并进行双荧光素酶报告基因活性检测，确定杂色鲍 HSP 90基因核心启动子区位于–98~83 bp。在–624~–539 bp，Oct-1、C/EBPalpha、NF-1这3个转录因子都起到一定的抑制作用。