Minimal structural glyco-epitope for antibody recognition

L'importance biologique de la glycosylation pour la sante et la maladie est largement reconnue. Les structures tronquees a terminaison mannose consistant en 1 a 3 residus de mannose, deux N-acetylglucosamines et un nombre variable de fragments fucose sont appelees paucimannose. Les N-glycanes paucimannosidiques sont abondamment exprimes dans les plantes et les invertebres. Cependant, chez les vertebres, leur presence est limitee a certaines conditions pathophysiologiques, telles que le cancer, les troubles immunitaires, les infections et l'inflammation, et chez les individus en bonne sante, ils ne sont detectables qu'en quantites infimes. Il a ete demontre que le Mannitou, un anticorps monoclonal murin, reconnait specifiquement les glycoepitopes de paucimannose.Une tentative de caracterisation de la structure de Mannitou IgM a ete faite en appliquant des techniques de modelisation d'homologie, de microscopie cryoelectronique et de cristallisation. L'anticorps complet de Mannitou a ete genere en utilisant la technologie des hybridomes. Le Fab recombinant de Mannitou a ete exprime avec succes de maniere transitoire dans des cellules HEK293T. La specificite de liaison de Mannitou envers differents N-glycanes de paucimannose ont ete elucidees par une combinaison de methodes experimentales. Le criblage par microreseau a revele que le glyco-epitope minimal etait Man2GlcNAc2. A son tour, Man3GlcNAc2 a manifeste l'une des interactions les plus fortes avec l'anticorps Mannitou. Des etudes de reconnaissance moleculaire, utilisant des mesures de resonance plasmonique de surface et une calorimetrie de titrage isotherme, ont etabli une affinite de liaison micromolaire de l'anticorps Mannitou envers le glycane Man3GlcNAc2. La cartographie de l'epitope de liaison par resonance magnetique nucleaire de transfert de saturation a demontre que Manα1-3 est le principal residu implique dans la reconnaissance des anticorps de Mannitou. La regulation positive des N-glycanes paucimannosidiques dans des conditions physiopathologiques fait de l'anticorps Mannitou un outil diagnostique et therapeutique prometteur.Pour determiner la structure minimale des glycanes requise pour mimer l'activite antigenique du polysaccharide MenX natif, des etudes de resonance plasmonique de surface ont ete realisees. Les experiences ont consiste a etudier les interactions de liaison entre un anticorps anti-MenX et des oligosaccharides capsulaires du serogroupe X de Neisseria meningitides de differentes longueurs. Les resultats suggerent que la portion minimale de saccharide capable d'assurer une protection contre les infections a MenX pourrait etre DP5, ce qui en fait un candidat prometteur pour le developpement de vaccins.