家兔矮小同源盒基因( Shox 2)的克隆和表达分析

为了研究新西兰白兔矮小同源盒基因（ Shox 2）序列，预测其结构和功能，以及研究 Shox 2基因的时空表达特征，本研究克隆了新西兰白兔 Shox 2基因全长CDS区，分析其编码蛋白的同源性、亲疏水性、二级和三级结构特点、系统进化树等生物信息学特征，并用Western blot法验证融合蛋白TrxA-Shox2。分别在胚胎中期（E20.5 d）、胚胎后期（E28.5 d）、幼龄期（出生后10 d）、成年期（A）4个时间点采集3只动物的肾、大血管、真皮、心、大脑、肝、肺、脾、肌肉、胆囊共10种组织，采用实时荧光定量PCR技术研究 Shox 2基因的时空表达图谱。结果，成功克隆了新西兰白兔 Shox 2基因（登录号：KP726285）。 Shox 2基因CDS区全长666 bp，翻译221个氨基酸。生物信息学分析显示，Shox2为碱性、不稳定蛋白，Shox2蛋白氨基酸二级结构中α-螺旋区域占61.99%，无规则卷曲区域占33.48%，延伸链占4.52%。Western blot验证了融合蛋白TrxA-Shox2的表达。家兔Shox2蛋白氨基酸序列与眼镜猴、猩猩、褐家鼠、人的氨基酸序列同源性较高，说明Shox2蛋白在进化中较保守。 Shox 2基因mRNA在很多器官都有表达，在E20.5 d的家兔胚胎中， Shox 2 mRNA在肾、肌肉和胆囊的表达量高，在E28.5 d时表达量较高的是脾、心，幼龄期时表达量较高的是真皮、肝，成年期时表达量较高的是真皮、脾。本研究成功克隆了新西兰白兔 Shox 2基因，预测了其结构和功能。 Shox 2基因mRNA在很多器官都有表达，不同的组织和不同时间特征的表达量变化可能与 Shox 2功能高度相关，并受到严格的调控。