ANÁLISE DA EXTRAÇÃO DE DNA DE Mycobacterium tuberculosis DE AMOSTRA CLÍNICA PELA COMPARAÇÃO DE MÉTODOS

A tuberculose (TB) e uma doenca infecciosa, com altos indices de mortalidade. A tecnica de extracao atraves de beads-magneticas e fundamentada na interacao do DNA com particulas magneticas revestidas de silica. A tecnica de extracao por resina de silica e baseada na interacao da silica com grupamentos do DNA. A extracao de DNA por ultrassom consiste no rompimento da parede celular bacteriana pela emissao de vibracoes ultrassonicas. Considerando que o metodo selecionado para extrair DNA presente na amostra clinica e um fator relevante, podendo influenciar na acuracia das tecnicas de amplificacao. Este trabalho foi realizado visando a comparacao das tres tecnicas de DNA descritas acima para isolar DNA de M. tuberculosis de amostras de escarro. Foi realizado um pool com 10 amostras negativas para tuberculose, posteriormente foram contaminadas com Mycobacterium Bovis BCG, e dividas em 10 aliquotas. As amostras foram centrifugadas e ressuspendidas em TE 1X ate atingir o volume de 1,5 mL. Apos foram divididas em tres aliquotas de volume igual. Cada aliquota foi processada pelas tres tecnicas. A extracao de DNA por silica foi realizada com os reagentes componentes do kit DETECT-TB (Labtest. MG). A extracao de DNA atraves de BEADS-MAGNETICAS foi realizada utilizando reagentes que compoem um prototipo de kit de extracao de DNA da empresa Ampligenix (MG). A extracao de DNA por ULTRASSOM utilizou o protocolo adaptado de SCHIMID, 2014. O DNA purificado das amostras foi amplificado por PCR convencional, utilizando o kit DETECT-TB, que amplifica um fragmento de 245 pb com primers especificos da regiao de DNA (IS6110). Posteriormente foi realizado uma eletroforese em gel de agarose 1,5%. Foram analisadas 10 amostras positivas com cada tecnica. Os produtos de amplificacao dos DNAs extraidos pelas tres tecnicas apareceram como bandas no gel de agarose. O metodo que utiliza a silica apareceu como uma banda forte em todas as amostras. As BEADS-MAGNETICAS apresentaram uma amostra como banda fraca e no metodo de ULTRASSOM uma amostra com banda bem fraca e outra nao amplificou.  Os resultados iniciais mostraram que o metodo de extracao que utiliza a silica para purificar o DNA foi o que recuperou uma concentracao de DNA maior em todas as amostras, demonstrando uma sensibilidade maior em relacao as outras tecnicas testadas que tambem deram positivas. Ainda sera realizado o teste com outras amostras.