单基因人肝癌耐药细胞株（HepG2／MRP1）的构建及其生物学意义

目的对抗肿瘤药的天然耐药和化疗过程中产生的继发性耐药是肝癌化疗敏感性差的重要原因之一，为探讨体外逆转肝癌多药耐药（multidrug resistance，MDR）的新方法，笔者建立了单因素人肝癌细胞多药耐药模型HepG2／mrp1，并研究其生物学特性。方法双酶切克隆质粒pGEM—mrp1获得人全长多药耐药相关蛋白基因（mrp1），并将其插入哺乳动物表达载体pCI—neo的多克隆位点，构建重组载体，利用质脂体法将重组载体转人人肝癌细胞HepG2，建立单基因耐药细胞株HepG2／mrp1。观察细胞的生长规律；MTT法检测其多药耐药性；流式细胞仪检测细胞表面多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein，MRP）的表达；RT—PCR检测MRP1 tuRNA表达量。结果与HepG2细胞相比较，HepG2／mrp1细胞的倍增时间延长30．86h。该细胞对多种抗肿瘤药耐药，HepG2／mrp1对阿霉素和柔红霉素的耐药指数比亲本细胞增加了11．4倍和8倍，细胞表面MRP1的表达明显增加，mrp1 tuRNA明显增加。结论HepG2／mrp1细胞稳定高表达MRP1，具有多药耐药性，为进一步研究肝癌的多药耐药构建了一个技术平台。