Validation du nouveau système hemaPEN® pour le dosage des métaux

Objectifs Valider le dosage simultane de 4 metaux (Pb, Cd, Hg et As) en utilisant le dispositif hemaPEN de la societe Trajan. Methode hemaPEN est un systeme de prelevement et de depot sur disques papier d’un volume parfaitement mesure de sang capillaire. Le dispositif comporte 4 capillaires en verre de 2,74 μL, 4 disques de papier de 3,5 mm et un dessicateur permettant la conservation des disques. Au contact d’une goutte de sang, les 4 capillaires se remplissent entierement et simultanement puis, sont mis au contact des disques permettant le transfert du sang sur ces derniers. Nous avons choisi de valider 4 elements d’interet toxicologique sur sang total (Pb, As, Hg, Cd). L’extraction utilise 400 μL d’une solution comprenant Triton X-100 0,5 %, HNO3 0,05 M, rhodium 1 μg/L. Le dosage est realise par ICP-MS (NexION 2000™, Perkin Elmer) sur un disque extrait par 400 μL de solution. Pb, Cd et Hg sont doses en mode standard et As en mode DRC avec O2. Le rhodium est utilise comme etalon interne. La validation analytique a ete realisee sur des filtres avec depot a la pipette de 2,74 μL de sang. Le rapport final de dilution est de 1/145. Resultats Les conditions d’extraction retenues permettent une recuperation moyenne de 100 %, 106 %, 101 % et 99 % pour Pb, As, Cd et Hg respectivement. Les Ldq (10 sd du blanc) sont de 0,011 μmol/L (2,3 μg/L) pour Pb, 3,5 nmol/L (0,26 μg/L) pour As, 0,2 nmol/L (0,04 μg/L) pour Hg et 1 nmol/L (0,11 μg/L) pour Cd. La repetabilite sur 3 niveaux est inferieure a 10 % pour les 4 elements sauf Hg au niveau bas (14 %). L’analyse de 20 blancs « filtres » montre une contamination sans impact pour Pb, As et Hg. Pour Cd, la contamination est tres variable et depasse parfois les valeurs de reference du sang. L’exactitude, calculee par analyse de CQI, est satisfaisante pour Pb, As et Cd sauf pour les valeurs faibles de Cd en raison de la contamination des filtres. Pour Hg, elle n’est pas satisfaisante car les conditions analytiques ne sont pas celles utilisees en routine pour cet element. Dix-sept sangs veineux de plombemie connue (0,035 a 3,60 μmol/L) ont ete deposes sur des filtres et analyses. L’equation de correlation obtenue est : Pbfiltres = 1,05 × Pbroutine + 0,004, r = 0,9975. Enfin, 15 patients ont ete testes pour le plomb avec le systeme complet et compares au dosage de routine. Pour des valeurs de 0,05 a 2,38 μmol/L, l’equation de correlation obtenue est : PbhemaPEN = 0,952 × Pbroutine + 0,07, r = 0,990. Conclusion Nos resultats montrent qu’il est possible de doser avec de bonnes performances des metaux sur un volume de sang aussi faible que 2,74 μL avec un facteur de dilution 3,6 plus important que celui d’une methode de routine. Les resultats de la validation pour As et Pb sont bons et, pour Pb, satisfont les criteres exiges pour l’accreditation. On observe une excellente correlation entre les plombemies mesurees avec l’hemaPEN et le dosage de routine chez des patients. L’interet de ce type de dispositif microsampling est de disposer de 4 disques simultanement permettant soit de sensibiliser le dosage (elution de plusieurs disques) soit de doser des molecules organiques. Nos resultats valident l’utilisation de l’outil hemaPEN pour le dosage des metaux. Une application pour des etudes environnementales est en cours d’etude, necessitant la maitrise de la contamination lors du prelevement, particulierement pour le dosage du plomb.