Locked nucleic acid-enhanced quantitative real-time PCR detection of Ralstonia solanacearum in tobacco planting soil

为了定量检测植烟土壤中青枯雷尔氏菌的数量，有效防控烟草青枯病，构建了一种锁核苷酸（LNA）荧光定量PCR检测方法。以青枯雷尔氏菌细胞色素c基因（ Cyt c ）（NCBI Genebank序列号：WP_011002214.1）为靶标，采用LNA技术合成覆盖目标片段的引物序列，结合荧光定量PCR技术，进行了植烟土壤中烟草青枯雷尔氏菌数量的快速检测。结果表明，所构建的 Cyt c 基因标准曲线的 R 2 ＞0.99，相关性较好。与普通DNA引物相比，采用 Cyt c 基因LNA引物进行的PCR适用退火温度更高，扩增效率也更高。通过对水稻土发病烟田18个土壤样品的检测，表明青枯雷尔氏菌数量在2.52×10 4 ~1.88×10 7 个/g土壤之间。因此，构建的一种基于 Cyt c 基因的LNA增敏定量PCR检测体系，适用于水稻土等植烟土壤中青枯雷尔氏菌的定量检测，对烟田土壤的提前检测有助于烟草青枯病发生的预警。