Herramientas de biología molecular en el diagnóstico y epidemiología de la leishmaniasis

Los instrumentos de biologia moolecular se han usado con exito en el diagnostico y caracterizacion de Leishmania spp. El objetivo de esta conferencia es presentar dos tecnicas desarrolladas en nuestro laboratorio con aplicaciones en el diagnostico y la caracterizacion molecular de las infecciones por Lesishmania. El diagnostico se lleva a cabo con una tecnica PCR "Nested" orientada al gen SSUrRNA(LnPCR). Esta tecnica se ha utilizado en el diagnostico y tratamiento que supervisaba a 38 pacientes coinfectados por Leishmania /VIH produciendo una sensitividad de 95, 45% al usar sangre y de 100% al usar medula espinal, pudiendo predecir recaidas despues del tratamiento en una media de cinco meses antes que usando las tecnicas clasicas de diagnostico. Ademas la LnPCR se ha usado en sangre coagulada de jeringuillas de IVDUs(comunidades de ususarios de drogas intravenosas) para evaluar el papel que las jeringuillas compratidas representan en la transimision de Leishmania en las comunidades IVDUs(65 positivas de 125 muestras y 52 de 154 en dos grupos diferentes que se estudiaron). Cuando la LnPCR se aplica sobre muestras de medula espinal de perros sospechosos de haber contraido leishmaniasis (se estudiaron 71 perros) y se compara con otras tecnicas de diagnostico, los resultados de sensibilidad son los siguientes: microscopia de medula espinal(ME) 56% cultivo de ME 46% LnPCR de ME 76% IFI 87% ELISA 86%. La caracterizacion molecular se basa en una PCR "Semi-nested" orientada a los minicirculos de Leishmania (ADNk snPCR) y en un analisis RFLP (Poliformismo en el tamano de fragmentos de restriccion) de la tecnica PCR. Esta metodologia combinada (PCR-RFLP)permite establecer genotipos. Al observar a 40 pacientes coinfectados por Leishmania/VIH antes y despues de la quimioterapia pudimos demostrar que en 7, 5% de los casos los pacientes sufrian reinfecciones en lugar de recaidas