TRIAGEM PARA ENZIMAS HIDROLÍTICAS DE FUNGOS FILAMENTOSOS ASSOCIADOS A SUBSTRATOS AGROINDUSTRIAIS

Introducao: o isolamento de fungos a partir de substratos agroindustrias e uma alternativa para obtencao de micro-organismos produtores de enzimas hidroliticas ja adaptadas a esses substratos e, potencialmente, de interesse biotecnologico. Objetivos: isolar fungos filamentosos a partir de substratos agroindustriais e avaliar a atividade celulolitica e proteolitica. Material e metodos: milho triturado e soja (0,5g/substrato), adquiridas em mercado local, foram inoculados em meio Batata Dextrose Agar (BDA) suplementado com 0,1 μg/mL de cefalotina. As placas foram incubadas (25 ± 2°C) por ate sete dias e, apos o crescimento, os isolados foram purificados, caracterizados morfologicamente, agrupados em morfotipos e preservados (metodo de Castellani). Para verificacao de atividade celulolitica (AC), representantes de cada morfotipo foram repicados em meio CMC (0,5% de carboximetilcelulose; 1,0g/L de glicose; 0,1g/L de extrato de levedura; 0,5g/L de peptona; 16,0g/L de agar; agua destilada q.s.p. 1,0 L), enquanto que para verificacao de atividade proteolitica (AP) ocorreu a repicagem em meio BDA suplementado (9:1) com uma solucao esteril de leite em po desnatado constituido (10%). Para revelacao da AC, utilizou-se solucao aquosa de vermelho congo a 0,2% (15 min) e lavagem com 5,0 mL de solucao de NaCl 1,0 M. O aparecimento de uma zona mais clara ao redor das colonias indicou AC positiva. Para revelacao da AP, foi verificada a presenca de um halo translucido, que significa que o agente e proteolitico. Para linhagens com AC positiva, calculou-se o Indice de Relacao Enzimatica – IRE (D/d), em que D = diâmetro total (halo + colonia) e d = diâmetro da colonia. Resultados: fungos filamentosos foram obtidos a partir de ambos substratos (milho = 3,6 x 10² UFC/g, agrupados em cinco morfotipos; soja = 4,0 x 103 UFC/g, correspondendo a sete morfotipos). Com relacao a AC, 100% dos isolados foram positivos, com IRE variando entre 1,02 a 3,00 (media ± desvio padrao = 1,47 ± 0,14). Com relacao a AP de linhagens de milho, 40% (2/5) foram positivas. Conclusao: ha uma grande variedade de fungos filamentosos associados a substratos agroindustrias, capazes de produzir enzimas hidroliticas potencialmente uteis a bioindustria, que podem e devem ser explorados do ponto de vista biotecnologico.