Construcción de vectores de integración de saccharomyces cerevisiae y su aplicación en el genoma de neurospora crassa

El presente trabajo describe la construccion de tres vectores de integracion y un vector de replicacion autonoma de Saccharomyces cerevisiae. Dichos vectores se caracterizan por poseer el gen LEU2 de levadura y los genes de resistencia a ampicilina y tetraciclina que sirven como marcadores geneticos en Escherichia coli. Por otro lado, el gen LEU2 puede ser utilizado en la seleccion de transformantes de Sacharomyces cerevisiae. Los plasmidos VCp1, VCp2,1, VCp2,2 y VCp2,3 transforman a la levadura en baja frecuencia (aproximadamente 10 transformantes/ug de DNA) y se comportan como vectores de integracion verdaderos. Los plasmidos VCp1 y VCp2,1 fueron utilizados para la construccion de dos genotecas de Neurospora crassa a fin de aislar secuencias de replicacion autonoma de Neurospora en levadura. A partir de la genoteca en VCp1, se pudo aislar un plasmido portador de un inserto que corresponde a un fragmento de 3,5 kb de DNA del hongo (AU)