淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、细小脲原体多重荧光定量PCR检测方法的建立及临床应用

目的建立淋病奈瑟菌（Neisseriaagonorrhoeae，NG）、沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，CT）、细小脲原体（Ureaplasmaparvum，uP）多重荧光定量PCR（fluorescentquantitativePCR，FQ—PCR）检测方法。方法选择NG保守基因porA、解脲支原体（Ureaplasmaurealytieum，uu）保守基因UPq及cT保守基因￡rp作为目标检测基因，设计引物及TaqMan探针，制备重组质粒标准品，绘制标准曲线，建立多重VQ．PCR检测方法，并验证其敏感性、特异性及重复性。用建立的方法对203份泌尿生殖道感染NG、CT、UP的临床样本进行同步检测，并与单重VQ—PCR法、常规PCR法及基因测序结果进行比较。结果重组质粒标准品经双酶切及测序鉴定，证明构建正确；建立的标准曲线起始DNA拷贝数与0值之间的线性关系良好，相关系数为0．998～1．000；该方法检测NG、CT和uP的灵敏度均可达10：copies／ml，检测范围可达10。～10。copies／ml，相关系数分别为1．000、0．999和0．995；不与生殖道其他菌群如阴道霉菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、人型支原体、单纯疱疹病毒I型、Ⅱ型及人乳头瘤病毒（16／18型）发生交叉反应；检测的203份样本中，多重VQ—PCR检测NG、CT、UP的阳性检出率分别为34．48％、30．54％、18．71％，与单重VQ．PCR法、基因测序法比较，差异无统计学意义（P〉0．05），3种方法阳性检出率均高于常规PCR法；与基因测序法相比，多重FQ—PCR法灵敏度为100％，3种病原体检测特异性均高于98．50％。结论已成功建立NG、CT、UP多重VQ．PCR检测方法，该法检测时间短，特异性强，灵敏性高，适合于临床快速诊断；