Etude d'un marqueur génétique du suspenseur chez Arabidopsis thaliana et application d'un système d'activation de gène à la recherche de sa fonction

La lignee 276S presente un marqueur moleculaire issu d'une strategie de piege a promoteur (insertion de l'ORF GUS via un ADN-T). Dans cette lignee, l'activite GUS est restreinte au suspenseur depuis le stade preglobulaire jusqu'a sa degenerescence au stade torpille. Un ARNm du gene etiquete par l'ADN-T est detecte dans des extraits de siliques. L'etude de sa sequence suggere l'existence d'un peptide de 25aa : SUP25, qui s'aligne avec les peptides de la famille HOK/GEF impliques dans une voie de mort bacterienne programmee lors de la strategie du plasmide egoiste. L'expression transitoire du gene SUP25 dans les cellules d'oignon tout comme l'application du peptide SUP25 sur protoplastes d'Arabidopsis revele une fonction toxique du gene. Une methode de detection de la fragmentation d'ADN permet d'envisager l'intervention du peptide dans une voie de MCP. SUP25 est donc probablement implique dans la degenerescence du suspenseur. Afin de caracteriser la fonction du gene in planta, et pour conduire l'expression de genes au cours de l'embryogenese, nous avons utilise le syteme d'activation de genes pOp-LhG4 elabore par Moore et al. (1998). Le systeme repose sur 2 composants (un facteur de transcription LhG4 et sa cible pOp) separes dans deux plantes distinctes (respectivement activatrice et rapporteur. Le gene raporteur est transactive en F1 dans le croisement entre 2 parents selon le profil de l'activateur. 3lignes activatrices ont ete generees en conduisant l'espression du LhG4 dans differents profils de promoteurs (p35S, paBI3 et pSUP25) ainsi que 4 rapporteurs dont les genes sont sous controle du promoteur pOp (GUS, GFP, SUP25 et AntiSUP25). Le systeme est fonctionnel dans A. Thaliana et fiable a partir dsu stade coeur. En revanche, avant le stade coeur le systeme serait dependant du phenomene d'empreinte parentale. Pour la GFP, nous avons genere un nouveau variant : tevL-EGFPer pour lequel le seuil de detection est 6 fois superieure a celui de tevL-EGFP et 28 fois superieure a celui detevL-mGFP5er.