利用CRISPR/Cas9技术定点敲除烟草多酚氧化酶基因 NtPPO1

植物多酚氧化酶具有多种重要的生理功能。为研究烟草中多酚氧化酶基因功能, 从GenBank中挑选一个烟草多酚氧化酶基因(基因登录号为XM_016608009.1), 命名为 NtPPO1 。 NtPPO1 编码序列经PCR扩增、克隆测序验证后, 采用CRISPR/Cas9技术定点敲除 NtPPO1 , 并利用实时荧光定量PCR检验基因敲除效果。研究表明烟草 NtPPO1 全长1 746 bp, 存在2种可变剪切方式。经测序与分析发现, T 2 突变体中的 NtPPO1 序列在靶位点处发生了1个、2个碱基的缺失突变与1个碱基的插入突变。实时荧光定量PCR检测结果显示, 与对照相比, T 2 突变体中 NtPPO1 表达水平显著下降。烟株外观显示 NtPPO1 突变体与野生型对照之间无明显差异。