太平洋牡蛎( Crassostrea gigas )类α-1, 2-岩藻糖基转移酶的密码子优化与原核表达

牡蛎消化组织内存在的类A型血型组织抗原是其特异性富集诺如病毒的主要原因，FUT2（Fucosyltransferase 2，α-1,2-岩藻糖基转移酶）是A型血型组织抗原合成的关键酶。本研究在前期克隆了太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）类FUT2基因cDNA全长的基础上，根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成了类FUT2基因，插入原核表达载体pRSET A构建pRSET-mof，将其转化大肠杆菌BL21，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导。经SDS-PAGE分析显示，在37℃、IPTG终浓度为0.8 mmol/L的条件下，诱导4 h后出现大小约为46 kDa的特异性目的条带。利用His亲和层析柱纯化及超滤管浓缩目的蛋白，得到单一条带，说明纯化效果良好。Western blot分析显示，目的蛋白与抗6×His标签单克隆抗体、抗人FUT2单克隆抗体均能发生特异性反应，表明优化后的太平洋牡蛎类FUT2基因在大肠杆菌系统中成功表达。本研究结果为今后研究太平洋牡蛎类FUT2基因的功能，进一步探索牡蛎特异性富集诺如病毒的分子机理奠定了基础。