Arthrobacter ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶可溶性表达及产酶条件优化

2017 
目的克隆 Arthrobacter ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶的编码基因( alanine dehydrogenase ),转化至 Escherichia coli Rosetta(DE3)中构建可溶性表达 alanine dehydrogenase ( ald )的工程菌CZR07并优化产酶条件。 方法提取 A. ureafaciens CZ31菌株的全基因组DNA,设计引物扩增出ald基因,与pET-28a连接后导入 E. coli Rosetta中表达并纯化重组蛋白,以单因素实验结果为依据,响应面法优化发酵条件。 结果 ald 全长为1119 bp,编码含372个氨基酸残基的蛋白质,分子量约为40 kDa,酶活为2.65 U/mg。响应面分析温度、诱导时间及诱导剂浓度的影响强度为IPTG浓度 > 温度 > 温度×IPTG浓度 > 温度×诱导时间 > IPTG浓度×诱导时间 > 诱导时间。CZR07摇瓶发酵最佳条件为温度22 ℃、IPTG 0.7 mmol/L、诱导时间7 h,此条件下重组酶酶活达到15.23 U/mg,与响应面优化的预测值相似,较优化前提高5.75倍。 结论克隆并实现了CZ31中 ald 基因的可溶性表达,采用BBD法优化产酶的诱导条件,获得显著的优化效果,为其他工程菌株产酶条件优化提供借鉴。
    • Correction
    • Source
    • Cite
    • Save
    • Machine Reading By IdeaReader
    0
    References
    0
    Citations
    NaN
    KQI
    []