Transparisation et analyse 3D application à l’étude de la plasticité adaptative des cellules bêta pancréatiques

Nous avons recemment demontre dans un modele murin d’insulinoresistance induit par la corticosterone la mise en place d’une adaptation des cellules beta pancreatiques caracterisee par la formation de nouvelles cellules beta (Courty et al, Diabetes, 2019). Des techniques de quantification classiques par immunomarquage en 2D mettent en evidence l’augmentation de la masse de ces cellules, via l’augmentation du nombre d’ilots de Langerhans, apres 4 semaines de traitement. Cependant, ces methodes ne permettent d’avoir qu’une estimation de la quantite de cellules. Notre objectif est de quantifier le nombre total d’ilots, avec une analyse non biaisee de la taille et de la distribution spatiale des objets dans l’ensemble du pancreas. Nous avons mis au point un protocole sur des pancreas de souris C57BL6/J traitees ou non avec de la corticosterone (15 mg/kg/j ; 4 emaines). Les organes ont ete laves, fixes, immunomarques pour l’insuline et transparises. Nous avons ensuite realise des acquisitions sur un microscope a feuille de lumiere et une reconstruction 3D avec le logiciel Arivis. Nous avons valide notre technique d’immunomarquage et de transparisation pour la quantification du nombre total d’ilots sur pancreas entier. Les premieres analyses revelent une quantification plus precise ainsi qu’une meilleure resolution et sensibilite que l’etude en 2D. Cette nouvelle technique, constituant une avancee methodologique majeure dans l’analyse morphologique pancreatique, permet une quantification fiable du nombre, de la taille et de la distribution spatiale des ilots au sein du pancreas dans notre modele ainsi qu’une meilleure comprehension de la dynamique adaptative des cellules beta pancreatiques.