靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR~(262-328)的构建及免疫原性分析

目的构建靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗PCMk-EGFR^262-328并分析其免疫原性。方法采用重叠延伸PCR来扩增PCMk-EGFR^262-328融合基因，克隆至pMD18-T，经测序鉴定后与pET-21b构建重组表达载体，并转化大肠杆菌BL21（DE3）。目的蛋白经IPTG诱导表达后用SourceQ阴离子层析和Ni-NTA亲和层析纯化，纯化的融合蛋白乳化后免疫BALB／c小鼠分析其免疫原性。结果获得了2031bp的融合基因，IPTG诱导后获得了相对分子质量（以）70000大小的目的蛋白，经两步柱层析后，融合蛋白达到了95％以上的纯度，并在小鼠体内产生了高达1：16000以上的抗体滴度。结论成功制备了肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR^262-328。