Les sels QuEChERS pour l’identification et la quantification de benzodiazépines et métabolites dans les prélèvements biologiques par LC–MS/MS

Resume Ces travaux decrivent une procedure d’extraction faisant appel aux sels QuEChERS et permettant une recherche et un dosage rapides de benzodiazepines pour des applications hospitalieres et medico-legales. Les 43 molecules suivantes sont considerees : 24 benzodiazepines commercialisees, 10 de leurs metabolites, 8 benzodiazepines de synthese (diclazepam, etizolam, deschloroetizolam, flubromazepam, flubromazolam, meclonazepam, clonazolam et nifoxipam) et la 2-amino-5-chloropyridine (ACP ; produit de degradation de la zopiclone). Le protocole d’extraction est le suivant : a 100 μL de matrice sont ajoutes 200 μL d’acetonitrile et, apres agitation au vortex et 10 minutes au congelateur, environ 40 mg de sels QuEChERS Mix I (4 g MgSO 4 , 1 g NaCl, 0,5 g Na 2 H citrate 1,5 H 2 O, 1 g Na 3  citrate 2  H 2 O) sont ajoutes. Apres centrifugation pendant 10 minutes a 13 000 tours/min, 50 μL de surnageant sont dilues dans 150 μL de phase mobile aqueuse, avant injection de 5 μL dans le systeme LC–MS/MS. Le systeme chromatographique associe deux pompes UHPLC Nexera X2 LC-30AD, un four CTO-20AC, un passeur d’echantillons Nexera X2 SIL-30AC (Shimadzu, France) et une colonne Pinnacle DB PFPP (50 mm × 2,1 mm et de granulometrie 1,9 μm ; Restek ® ). La detection est realisee au moyen d’un spectrometre de masse en tandem 8050 (Shimadzu ® , France). Le temps d’acquisition est de 6,3 min et une procedure de validation satisfaisant aux exigences de la norme ISO 15189 a ete appliquee dans le sang total, le serum et l’urine (a l’exception des 8 benzodiazepines de synthese et de l’ACP). La methode a ete testee dans un echantillon de 50 patients. L’extraction de 6 points de gamme, 2 controles et 10 echantillons de patients, necessitent 30 a 45 minutes de preparation, permettant un rendu des resultats en moins de 3 heures pour une telle serie. Dans un contexte de toxicologie hospitaliere, un resultat patient est rendu en moins d’une heure.