大黄鱼 Lc-UBE2D4 基因的克隆及其表达分析

泛素缀合酶E2是蛋白质泛素化系统中的关键酶，对降解的靶蛋白的特异性选择起决定性作用，参与了细胞内80%以上的蛋白降解，对于细胞周期调控、细胞凋亡、基因转录及表达等生理活动具有重要的调控作用。本研究从已构建的大黄鱼（ Larimichthys crocea ）性腺线性化cDNA文库中筛选出泛素缀合酶（Ubiquitin-conjugating enzymes E2 D4， Lc - UBE2D4 ）同源基因片段，利用SMART-RACE方法克隆出其全长cDNA序列，并利用荧光定量PCR技术检测其在大黄鱼不同组织和性腺不同发育阶段的差异表达情况。结果显示， Lc - UBE2D4 基因全长798 bp，其中ORF为441 bp，可编码147个氨基酸，含有一段典型的泛素缀合酶UBC结构域及其半胱氨酸激活位点。定量PCR结果分析发现， Lc - UBE2D4 在脾脏和性腺中表达量较高，在脾脏和精巢的表达水平极显著高于其他各组织（ P ＜0.01），同时在卵巢中的表达亦显著高于除脾脏和精巢外的其他各组织（ P ＜0.05）；通过对 Lc - UBE2D4 基因在性腺不同发育阶段表达模式的研究发现，该基因在精巢3个时期中的表达水平显著高于各发育阶段的卵巢（ P ＜0.05），推测 Lc - UBE2D4 基因在大黄鱼性腺发育过程中起着重要的调节作用，脾脏中的高表达也暗示其可能参与免疫机能。