Compared viability of planctonic bacteria and bacteria in biofilms by flow cytometry

L'etude des biofilms adherant aux surfaces les plus diverses montre de nombreuses couches de cellules dont une tres faible proportion est capable de se multiplier sans delai. Les autres, majoritaires, sont-elles mortes? Ces cellules sont au repos et il existe un gradient de metabolisme dans l'epaisseur du biofilm. Pour evaluer le risque de reprise de vie active, les biofilms ont ete etudies ici avec des fluorochromes, marqueurs de vitalite: un derive du diacetate de fluoresceine, CDF, revelateur d'une activite esterasique, confere une fluorescence verte au cytoplasme; l'iodure de propidium, IP, revelateur de lesions membranaires: s'il penetre dans la cellule, les acides nucleiques manifesteront une fluorescence rouge. La microscopie confocale permet de localiser les cellules rouges ou vertes dans l'epaisseur du biofilm, mais seule la cytometrie en flux (CMF) est capable d'une analyse semi-quantitative des cellules marquees. Cette etude met l'accent sur les conditions de validite des resultats de CMF. Apres avoir elimine l'autofluorescence des bacteries et de leur glycocalyx et choisi les concentrations de marqueurs depourvues de toxicite, la CMF devoile une abondante proportion de cellules doublement marquees, c'est-a-dire porteuses de lesions membranaires et capables de synthese d'esterase. Ces cellules doublement marquees sont-elles dangereuses pour la sante publique? Le plus souvent, elles peuvent reparer leurs lesions et recuperer leur vitalite des qu'elles se detachent du biofilm. Elles retrouvent alors capacites metaboliques et virulence, mais aussi leur sensibilite aux antibacteriens. La CMF a permis de caracteriser quatre niveaux de vitalite chez les streptocoques oraux en biofilm.