嗜碱细菌Cellulomonas bogoriensis 69B4 T 木聚糖酶的表达纯化及性质研究

目的对嗜碱细菌Cellulomonas bogoriensis 69B4T产碱性木聚糖酶进行研究，克隆来源于该菌株的木聚糖酶基因，并对其进行异源表达、纯化及酶学性质的表征，为后续研究碱性木聚糖酶的耐碱机制及应用奠定基础。 方法采用单因素分析法对菌株产碱性木聚糖酶情况进行研究；通过基因组分析，锚定5个内切木聚糖酶基因，利用同源扩增的方法进行克隆，并在大肠杆菌中重组表达，利用亲和层析对重组酶进行纯化，以木聚糖为底物表征木聚糖酶的酶学性质。 结果来源于C.bogoriensis 69B4T的5种木聚糖酶Xyn370、Xyn393、Xyn425、Xyn466和Xyn486均在大肠杆菌内实现了异源表达，并经亲和层析获得纯酶组分，其最适反应温度分别为60、50、40、40、60℃，在50℃范围内保温2 h，残余酶活均在90%以上；最适反应pH分别为7.0、8.0、8.0、8.0、9.0，在pH 5.0-9.0时具有较好的稳定性；5种重组木聚糖酶对部分金属离子和高浓度盐表现出较好的耐受性，对榉木木聚糖的酶活性最高，均为内切型木聚糖酶。 结论本研究表达纯化的5种重组木聚糖酶具有耐盐碱的优良特性，且对温度、某些金属离子和化学试剂耐受，为研究木聚糖酶的耐碱机制及工业应用提供了酶源。