Immunodosage rapide des toxines individuelles du venin d'Androctonus australis.

La mise en place d'une immunotherapie passive efficace des envenimations scorpioniques est facilitee par le dosage prealable des toxines circulantes chez les patients envenimes. Actuellement, les tests ELISA utilises en routine ne permettent que le dosage du venin total, sans distinction des toxines qui le composent et dont la diffusion tissulaire est variable. En prenant comme modele l'une des trois toxines responsables des effets letaux du venin du scorpion Androctonus australis hector (Aahl), nous avons developpe un test ELISA sandwich base sur l'utilisation d'un fragment d'anticorps recombinant (scFv) constitue des domaines variables de l'IgG monoclonale 9C2 couple a un decapeptide affin pour la streptavidine. L'immunoconjugue scFv/Strep-tag a ete prepare par genie genetique. Il est produit dans le periplasme de bacteries recombinantes, de facon reproductible, sous une forme soluble, a faible cout avec un rendement, apres purification, de 0,8 mg/L de culture bacterienne. La proteine recombinante, de petite taille (28 kDa), est bifonctionnelle. D'une part, elle conserve une affinite tres elevee pour la toxine Aah / (Kd de 2,3 10 -10 M, sensiblement equivalent a celui de l'IgG 9C2). D'autre part, elle reconnait la streptavidine et ses conjugues (streptavidine-peroxydase). Le dosage de la toxine Aahl developpe est un ELISA sandwich dans lequel la toxine est capturee de facon specifique par un anticorps monoclonal et les immuncomplexes sont ensuite detectes par l'immunoconjugue recombinant, conferant ainsi une haute specificite au dosage. Le test est rapide (90 mn), reproductible et sensible, avec une limite de detection de 0,6 ng/ml de toxine. Cette methodologie pourrait etre etendue aux deux autres toxines letales du venin du scorpion Androctonus australis hector et a celles d'autres especes. De nouvelles perspectives sont ainsi envisageables pour le diagnostic des envenimations.