Detecção e classificação molecular de Chlamydophila psittaci em amostras fecais de aves assintomáticas

Chlamydophila psittaci e uma bacteria que causa doenca respiratoria ou sistemica em aves e em seres humanos. Em vista do risco de transmissao para humanos, o objetivo deste estudo foi detectar a presenca de Chlamydophila spp. em amostras de fezes ou suabes cloacais de aves assintomaticas. Foram colhidas 403 amostras fecais ou suabes cloacais, provenientes de aves domesticas, selvagens ou exoticas. As amostras foram submetidas a PCR em tempo real para C. psittaci, para amplificacao de fragmento parcial do gene da subunidade 16S do rRNA, utilizando o SsoFastTM EvaGreen® Supermix (Bio-Rad) e analise da curva de dissociacao. Para determinacao do genotipo de C. psittaci, foi usada a hemi-nested PCR visando a amplificacao de fragmento parcial do gene OMP-A, realizada nas amostras positivas pela PCR em tempo real, seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados. A PCR em tempo real revelou positividade em 17 (4,21%) amostras. A hemi-nested foi positiva em 2 amostras positivas pela PCR em tempo real. O genotipo A de C. psittaci foi identificado pelo sequenciamento de uma amostra amplificada pela hemi-nested PCR. Os resultados deste experimento demonstram que a PCR em tempo real, visando a amplificacao de fragmento parcial da subunidade 16S do rRNA, seguida da analise da curva de dissociacao, pode ser utilizada para deteccao de DNA de Chlamydophila sp. em amostras fecais de aves assintomaticas. A classificacao da especie de Chlamydophila e do genotipo de C. psittaci deve ser realizada por meio de PCR tendo como alvo o gene ompA e sequenciamento dos fragmentos amplificados.