Changes of expression of FADD and Daxx following focal cerebral ischemia in rats

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后Fas相关蛋白FADD和Daxx在缺血半暗带的表达变化.方法 ①将SD大鼠随机分为假手术组和模型组.线栓法制备大鼠大脑中动脉梗阻(MCAO)模型,缺血2 h后恢复再灌注,再灌注后1、3、6、12和24 h处死动物.RT-PCR、免疫组织化学、Western blot等方法分别检测缺血半暗带FADD、Daxx mRNA和蛋白的表达变化;②免疫荧光双标分别标记神经元核区和FADD及Daxx蛋白染色区,激光扫描共聚焦显微镜观察二者在缺血再灌注前后神经元的定位.结果 再灌注3 h假手术组可以检测到少量的FADD mRNA和蛋白表达(mRNA:0.441±0.038;蛋白:156.78±13.04),模型组FADD mRNA和蛋白表达变化一致,在再灌注3 h开始上升(mRNA:0.628±0.059,P＜0.01;蛋白:131.28±5.99,F=15.692,P＜0.01),12 h达到高峰(mRNA:0.971±0.070,F=56.233,P＜0.01;蛋白:104.36±8.55,P＜0.01),24 h显著下降(mRNA:0.551±0.042,P＜0.05;蛋白:123.01±11.87,P＜0.01),模型组FADD mRNA和蛋白表达变化一致,在再灌注3 h开始上升(P＜0.01),12 h达到高峰(P＜0.01),24h显著下降(P＜0.05);假手术组可以检测到较高的Daxx mRNA和蛋白表达;模型组Daxx mRNA和蛋白表达变化一致,再灌注3 h开始上升(P＜0.01),此后持续上升,一直至24 h仍维持较高水平表达(P＜0.01);激光扫描共聚焦显微镜显示脑缺血再灌注后FADD的免疫活性位于胞质,Daxx的免疫活性从胞核向胞质移位.结论 大鼠脑缺血急性期FADD、Daxx mRNA和蛋白表达增加,可能参与了脑缺血后促凋亡作用。