Isolamento e caracterizaçao de promotor fruto-espicifico do gene CALTP1 de Coffea arabica

A disponibilidade de promotores endogenos, nao patenteados, que regulem a expressao do transgenes de forma limitada espacial e temporalmente e uma valiosa ferramenta para programas de melhoramento. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar o promotor fruto especifico do gene CALTP1 (que codifica uma proteina de transferencia de lipideos - LTP) de Coffea arabica. Por meio de analises in silico baseadas nas sequencias do banco de dados do genoma cafe, foram encontrados 40 Unigenes preferencialmente expressos em fruto que poderiam ser utilizados como sonda na prospeccao de seus respectivos promotores. Usando como criterios o nivel de expressao e o ineditismo, o gene CALTP1 foi escolhido para a validacao experimental por meio das tecnicas de Northern blot e RTqPCR. Os resultados demonstram que esse gene tem expressao preferencial no endosperma dos frutos aos 120 e 180 dias apos o florescimento (DAF). O isolamento do promotor desse gene foi feito por meio da estrategia 5' RACE. Um fragmento de 1.2 kb foi isolado do DNA genomico de C. arabica var. Catuai amarelo e tres fragmentos menores (1.0, 0.78 e 0.4 kb) oriundos de supressoes 5' do fragmento genomico foram produzidos. Esses fragmentos foram clonados em vetores binarios e transformados na planta modelo Nicotiana tabacum para analises de expressao envolvendo o gene reporter uidA codificando para a ?-glucuronidase (GUS). Os resultados das analises histoquimicas de atividade GUS mostram que os fragmentos de 1.2, 1.0 e 0.78 kb direcionam a expressao para todos os orgaos testados da planta com diferencas no nivel de atividade e, todos os tres fragmentos promovem expressao baixa ou nula em raizes. Por outro lado, o fragmento menor de 0.4 kb levou a expressao do gene uidA somente nas sementes, tecidos florais e frutos. (Resume d'auteur)