Extração de DNA utilizando a resina Instagene Matrix® como ferramenta para otimização do diagnóstico molecular de leishmaniose visceral canina (LVC) em Mato Grosso do Sul, Brasil.

Mato Grosso do Sul e considerada area endemica para as leishmanioses e no ambiente urbano o principal reservatorio da leishmaniose visceral e o cao. Parte das acoes de controle dessa doenca e a eutanasia de todos os animais com diagnostico positivo. Este trabalho utiliza a resina Instagene Matrix® como forma alternativa de extracao de DNA para diagnostico molecular da LVC em esfregaco de medula ossea e fluido peritoneal de cao, salientando a alta eficiencia, custo-beneficio e agilidade da tecnica. As duas amostras utilizadas no trabalho foram cedidas: uma pelo Hospital Veterinario da Uniderp e a outra do laboratorio Diagnovet. Ambas as amostras foram coletadas de caes SRD (sem raca definida) adultos, diagnosticados com poucos sinais clinicos de leishmaniose visceral. A extracao de DNA com a resina seguiu as indicacoes do fabricante. Foi recolhido 200 mL da amostra fluida, e no esfregaco em lâmina raspou-se o conteudo do esfregaco utilizando uma lâmina de bisturi esteril, o conteudo recolhido foi adicionado a um microtubo de 1,5 mL e em seguida adicionou-se 500 µl de agua para PCR. Entao incubou-se as amostras a temperatura ambiente por 30 minutos e logo apos centrifugou-as por 3 minutos a 12,000 rpm. O sobrenadante foi descartado e foi adicionado 200 µl da resina Instagene Matrix®, novamente incubou-se as amostras por 30 minutos a 56oC. As  amostras foram homogeneizadas em vortex por 10 segundos e incubadas pela ultima vez por 8 minutos a 100 oC. As amostras foram homogeneizadas novamente em vortex por 10 segundos e centrifugadas por mais 3 minutos a 12,000 rpm. O sobrenadante (50µl a 200µl) foi recolhido e foi utilizado para os testes moleculares. As amostras foram dosadas no Qubit® e ambas apresentaram grande quantidade de DNA (acima de 100 ng/µl) comprovando a eficiencia da tecnica de extracao. As duas amostras foram testadas pela PCR dirigida ao gene ITS1 de Leishmania spp. e ambas se mostraram positivas. A extracao de DNA utilizando a resina Instagene Matrix® se mostrou altamente eficiente, de facil manipulacao e rapida execucao na obtencao do DNA de qualidade de amostras biologicas de caes diagnosticados clinicamente com LVC. Palavras-Chave: Instagene, LVC, PCR. Apoio: Anahnguera-Uniderp, Fiocruz, CNPq, CAPES, FUNDECT.