Implication du canal cationique de la membrane externe dans la translocation des proteines mitochondriales

Nous avons etudie un canal localise sur la membrane externe mitochondriale et distinct de la porine mitochondriale. Ce canal, le peptide sensitive channel (psc), est bloque par deux classes distinctes de peptides basiques: des peptides issus de presequences et des peptides issus de proteines physiologiquement non reliees a la mitochondrie. Les caracteristiques electrophysiologiques de ce blocage sont compatibles avec un passage des peptides basiques a travers le canal. Ceci a conduit a proposer un role du psc dans la translocation des proteines mitochondriales. Nous avons etabli que les peptides issus des presequences sont importes in vitro dans la matrice mitochondriale et interferent avec la voie d'importation d'un precurseur chimere (preb2dhfr). En revanche, les autres peptides basiques actifs sur le psc sont importes dans l'espace intermembranaire et n'interferent pas avec cette voie. Nous avons montre que la dynorphine b (1-13), un peptide non mitochondrial actif sur le psc, etait transloque au sein de la membrane externe a travers ce canal confirmant ainsi ses proprietes de pore a peptides suggerees par l'electrophysiologie. Des experiences de reticulation chimique de la dynorphine b (1-13) avec des mitochondries de levure montrent que le psc est compose d'au moins un element du complexe d'importation des proteines mitochondriales, isp42. Nous avons confirme cette observation en montrant que l'immunodepletion de l'isp42 entrainait specifiquement une baisse de l'activite electrique du psc. L'implication du psc dans la translocation des proteines est verifiee par des experiences d'importation d'une proteine chimerique composee de la sequence de la dynorphine b (1-13) fusionnee en l'extremite n-terminale d'une proteine cytosolique. L'inhibition de cette importation par le peptide dynorphine b (1-13) montre l'implication du psc dans la translocation de cette proteine. Des experiences de proteolyse menagee de la surface mitochondriale montrent que des recepteurs de la membrane externe sont les elements qui discriminent les presequences mitochondriales des autres peptides basiques actifs sur le psc. Cette etape de reconnaissance specifique est suivie par une translocation au sein du meme pore aqueux qui presente les caracteristiques du psc. Le travail presente dans cette these montre que le psc est un authentique pore a proteines constitue d'isp42