Eine Methode zur Bestimmung von 25 Oestrogenen im Urin mit Hilfe der kombinierten Papier-, Dünnschicht- und Gas-Chromatographie

25 phenolische Steroide, von denen die meisten bereits aus dem Urin schwangerer Frauen isoliert worden sind, konnen getrennt und quantitativ bestimmt werden durch Kombination von Papier-, Dunnschichtund Gas-Chromatographie. Die Methode besteht aus folgenden Schritten: 1. Enzymatische Hydrolyse des Urins. 2. Extraktion des hydrolysierten Urins mit Ather. 3. Reinigung der Atherextrakte mit Natriumhydrogencarbonat und Wasser bei 0° C. 4. Mehrfache Chromatographie des Ruckstandes auf formamidimpragniertem Papier mit Monochlorbenzol, Chloroform, Cyclohexan, Monochlorbenzol/Athylacetat (3∶1) oder Chloroform/Athylacetat (5∶1) bzw. in zwei Bush-Systemen. 5. Acetylierung der aufgetrennten Oestrogene. 6. Dunnschicht-Chromatographie der Steroidacetate. 7. Quantitative Bestimmung der Acetate durch Gas-Chromatographie mit Hilfe eines Flammen-Ionisations-Detektors. Die Zuverlassigkeit der Methode (Richtigkeit, Genauigkeit, Spezifitat und Empfindlichkeit) wurde in Zusatzversuchen gepruft; zu diesem Zweck wurden jeweils 10 μg Steroid mannlichem Urin zugefugt. Die durchschnittliche Wiederfindung der zugesetzten 25 phenolischen Steroide schwankte zwischen 50 und 60%, wahrend der Variations-Koeffizient sich zwischen 5–15% bewegte. Durch mehrere mikrochemische Reaktionen konnte gezeigt werden, das selbst in der Anwesenheit von Urinpigmenten die Methode eine hohe Spezifitat besitzt. Mit Hilfe des angegebenen Verfahrens konnen etwa 1–2 μg Steroid pro 24 h-Urin quantitativ bestimmt werden.