Criblage par une injection unique de 664 composés toxicologiques « médicolégaux » à l’aide d’un spectromètre de masse haute résolution de paillasse innovant

Objectif La spectrometrie de masse quadripolaire en temps de vol (QTOF-MS) fournit des donnees de masse precises et a haute resolution pour obtenir des informations completes sur les ions precurseurs et tous les ions produit. Nous presentons ici une methode a injection unique pour le criblage de 664 composes les plus recents, rencontres dans des cas medicolegaux, a l’aide d’un spectrometre de masse QTOF de paillasse innovant. Les donnees obtenues ont fourni a la fois des informations structurelles et sur les temps de retention (TR) afin d’ameliorer la precision de l’identification, en particulier pour les isomeres. Methodes Des echantillons d’urine et de sang total ont ete dopes avec des melanges etalons et utilises pour determiner le temps de retention des 664 composes. Les echantillons d’urine ont ete dilues par de la phase mobile avant analyse ; les echantillons de sang total ont ete precipites et centrifuges ; le surnageant a ete evapore et reconstitue avec de la phase mobile avant analyse. Les analytes ont ensuite ete separes par chromatographie a l’aide d’une colonne Kinetex ® type Phenyl-Hexyl (50 × 4,6 mm, 2,6 μm, Phenomenex). Le QTOF-MS a ete utilise en mode electrospray positif avec des methodes MS/MS d’acquisition dependantes de l’information. Les echantillons ont enfin ete evalues par rapport a une liste de parametres contenant les noms, les formules moleculaires et les TR pour tous les composes. Resultats La performance de la separation a ete evaluee avec differentes phases mobiles (acide et neutre), conditions de gradient et types de colonnes. Les resultats indiquent que la plupart des composes isomeres ont ete entierement resolus avec un tampon neutre et un gradient lineaire de 10 minutes en utilisant la colonne Phenyl-Hexyl. Le TR a ete un element critique pour l’identification precise de chaque analyte a l’aide de cette methode de criblage. Les tests de reproductibilite des TR ont ete effectues pour chaque compose afin d’evaluer la robustesse de la chromatographie dans cette methode : sur 3 colonnes distinctes, dans le cadre d’une etude inter-journaliere ( n  = 3) ainsi que dans des echantillons purs par rapport a des echantillons matrice. Les essais de reproductibilite ont montre que les TR generes a partir des conditions de chromatographie optimisees sont satisfaisants. Les TR mesures sur trois colonnes d’analyse ont toutes des CV (exprimes en pourcentage) inferieurs a 5 % pour chacun des 664 composes. La reproductibilite inter journaliere du TR (teste sur 80 composes) a donne des CV inferieurs a 5 % sur 3 jours. Enfin, la variabilite du TR dans les echantillons de sang total et d’urine (teste sur 80 composes) indique que le CV pour 3 lots individuels est inferieur a 5 %. Conclusion Le TR determine par les conditions optimisees de la chromatographie combinee a la spectrometrie de masse haute resolution et aux spectres MS/MS a permis une identification precise des composes dans tout le flux de travail. Une analyse retrospective a egalement ete effectuee sur les ensembles de donnees acquis afin de depister de nouveaux composes sans avoir a reinjecter des echantillons, ce qui a permis de retraiter les ensembles de donnees au fur et a mesure que de nouvelles cibles medicolegales etaient decouvertes. For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.