中华绒螯蟹 Akt 基因的cDNA克隆、序列分析及表达特征

为研究 Akt 基因在中华绒螯蟹蜕壳前后肌肉生长过程中的功能，应用RACE技术克隆得到编码中华绒螯蟹Akt(命名为EsAkt)的全长为2 200 bp的cDNA序列，包括159 bp的5′非翻译区(5′-UTR)、496 bp的3′非翻译区(3′-UTR)和长度为1545 bp编码514个氨基酸的编码序列。蛋白质结构域分析显示EsAkt含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的3个特征性保守结构域。多序列比对和系统发育分析显示，EsAkt与中国明对虾、凡纳滨对虾的Akt序列一致性都为0.889，在系统发育树中节肢动物Akt形成一个分支。应用荧光定量RT-PCR技术分析EsAkt在性成熟中华绒螯蟹各组织及幼体不同蜕壳时期不同部位肌肉组织中转录水平上表达量的变化。结果显示，EsAkt在性成熟个体的肝胰腺、眼柄、表皮、卵巢、精巢、心脏、螯足、鳃、三角膜等组织中均有表达，其中卵巢、眼柄和精巢中表达量较高，肝胰腺中表达量最低。在幼体不同蜕壳时期不同部位的肌肉中，EsAkt表达量变化不同，步行足肌肉组织中EsAkt mRNA无显著的统计学差异。腹部肌肉组织中EsAkt mRNA水平在蜕壳前晚期D 3 ~D 4 期表达量显著高于蜕壳后A~B期和蜕皮间期C期。螯足肌肉在蜕壳前晚期D 3 ~D 4 期急剧下调，蜕壳后A~B期开始表达量显著升高，直至蜕皮间期C期。研究表明，EsAkt在中华绒螯蟹蜕壳过程中不同部位肌肉组织中的表达量变化与蜕壳周期密切相关，说明EsAkt参与中华绒螯蟹蜕壳诱导的肌肉萎缩、生长及重建过程。