油葵种子特异启动子 Ha ds10 G1 的克隆及功能鉴定

从油葵中克隆得到LEA蛋白基因家族 Ha ds10 G1 基因的启动子序列，并对其进行功能分析。利用PCR技术从油葵品种“矮大头“基因组DNA中分离 Ha ds10 G1 基因上游的调控序列，将其与 GUS 基因融合，构建种子特异性表达载体pBI121- PHa ds10 ，通过根癌农杆菌介导法转化烟草（ Nicotiana tabacum ）NC89，对再生植株进行PCR、RT-PCR和GUS组织化学分析，以检测 GUS 基因在转基因烟草中的表达情况。结果表明，油葵 Ha ds10 G1 基因启动子长度为1 417 bp，与已报道的向日葵 Ha ds10 G1 基因启动子序列同源性为89.42%。作用元件分析发现该区域除了具有启动子核心调控序列外，还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件，如RY重复元件、ABRE元件、TC-rich元件等。转基因植株的PCR结果显示，成功地获得了转基因阳性植株；GUS活性检测表明，该启动子序列仅能够驱动 GUS 基因在烟草种子表达，而在根、茎、叶等组织中均未检测到 GUS 基因表达。因此，油葵LEA蛋白基因家族 Ha ds10 G1 基因上游1 417 bp片段具有种子特异性启动子功能。研究结果为油葵等油料作物的油脂遗传改良提供组织特异性启动子。