靶向 HOXA 9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

目的: 探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9, HOXA 9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。 方法: 应用蛋白质印迹法从4条针对 HOXA 9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒 HOXA 9/GV118RNAi-LV#2。实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。 HOXA 9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测 HOXA 9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测 HOXA 9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1mRNA的表达。 结果: KD组细胞中 HOXA 9mRNA的沉默效率在55%以上, HOXA 9蛋白的表达量明显减少。VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC 50 )值明显降低( P P P HOXA 9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默 HOXA 9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性。