Vat (vacuolating autotransporter toxin) produzida por APEC (avian pathogenic Escherichia coli) : efeitos intracelulares e distribuição filogenetica

Escherichia coli isoladas de lesoes de celulite aviaria em frangos de corte produzem uma citotoxina que causa intensa vacuolizacao citoplasmatica em celulas de origem aviaria, mas nao em celulas de mamiferos. Esta citotoxina foi denominada Vat (vacuolating autotransporter toxin) e apresenta massa molecular de 56 kDa e ponto isoeletrico de 6,37. Estudos preliminares comprovaram que a Vat induz, em frangos de corte, respostas inflamatorias liberando as citocinas TNF-a e IL-10, indicando o seu papel relevante no desenvolvimento da celulite aviaria. A dose citotoxica para 50% das celulas foi determinada em 40 µg.mL-1. A Vat aplicada sobre cultura de celulas FEG (fibroblasto de embriao de galinha) induz perda da viabilidade em 50% celulas apos 18 horas de ensaio. Ensaios com a toxina indicam que, apos 24 horas, os lisossomos mostram-se bastante comprometidos (37% viaveis), a viabilidade mitocondrial decresce e se mantem durante as 24 horas do ensaio em cerca de 55%, havendo uma reducao acentuada das mitocondrias viaveis apos 36 horas da aplicacao da Vat. A membrana plasmatica das celulas FEG tambem sofre alteracoes de integridade, liberando 66,7 unidades de LDH (lactato desidrogenase)/mL, apos 12 horas de ensaio (pico maximo de liberacao, que corresponde a 51,7% do conteudo total de LDH em celulas FEG). A Vat induz alteracoes no citoesqueleto das celulas FEG e os ensaios com o marcador fluorescente Acridine Orange indicam que ha um aumento de RNA no citoplasma das celulas. Neste trabalho o gene vat foi detectado em amostras de APEC (filogrupos A e B1), UPEC e SEPEC (ambas em filogrupos B2 e D). Todas as amostras positivas para vat foram examinadas em celulas, sendo que 54% (27/50) apresentaram atividade vacuolizante em celulas FEG. Nossos resultados indicam que a Vat e uma toxina que induz diversas acoes intracelulares, podendo ser chamada de toxina multifuncional Abstract