利用CRISPR/Cas9技术建立 PTEN 敲除的人子宫内膜腺癌细胞模型及其功能研究

目的利用CRISPR/Cas9技术构建靶向PTEN的基因编辑质粒，构建PTEN稳定敲除的人子宫内膜腺癌细胞株KLE，并初步探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响。 方法设计靶向人PTEN基因的sgRNA序列，构建puro-cas9-PTENsgRNA质粒，测序验证；将重组质粒转染人子宫内膜腺癌细胞KLE，嘌呤霉素筛选获得PTEN稳定敲除细胞株；用T7E1酶切实验检测切割效率，Western blotting检测PTEN的蛋白表达水平，并检测细胞自噬相关因子LC3、P62的表达水平，检测细胞活性，探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞自噬的调控作用。 结果CRISPR/Cas9系统对KLE细胞基因组中的PTEN进行了切割，并在同源重组时发生了碱基错配，PTEN被成功敲除；PTEN敲除降低了细胞自噬相关因子LC3Ⅰ型向Ⅱ型转化，增加了P62的累积。PTEN敲除的细胞活性增强。 结论利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，在人子宫内膜腺癌细胞中成功敲除PTEN，抑制了人子宫内膜腺癌细胞的自噬水平，为后续研究提供了细胞模型。