Extraction, quantification and distribution of the major lipid fractions in small liver biopsies of cows in transition period

espanolExisten dificultades para conocer los cambios en la distribucion de las principales fracciones lipidicas en el higado de las vacas lecheras debido a la necesidad de tecnicas invasivas para su muestreo y de cantidades relativamente grandes de muestra para su analisis. El objetivo de esta investigacion fue integrar un metodo para la extraccion de lipidos totales (LT) con la determinacion enzimatica de sus diferentes fracciones en pequenas biopsias. Biopsias hepaticas provenientes de 60 vacas Holstein en el periodo de transicion (entre el dia 270 de gestacion y 20 posparto) fueron sometidas a la extraccion de LT utilizando una mezcla Hexano-Isopropanol. Los LT obtenidos fueron disueltos en hexano, varias alicuotas de diferentes volumenes fueron utilizados para la determinacion enzimatica de: trigliceridos (TG), fosfolipidos (FL), Colesterol total (CT) y Acidos Grasos Libres (AGL). La cantidad de muestra hepatica utilizada fue 49.6 mg ±18.45mg (Media ± Desviacion estandar). El promedio de LT fue 7.20%. El coeficiente promedio de variacion (CV) en la extraccion de LT fue 7,62%. Los TG, FL, CT y AGL representaron el: 52,5%; 18,30%; 19,30% y 0.41% de los LT respectivamente. Los CV para las determinaciones enzimaticas de TG, FL, CT y AGL fueron: 5,2%; 9,9%; 6,1% y 4,0% respectivamente, indicando que la determinacion de las principales fracciones lipidicas en pequenas biopsias de higado se puede realizar de manera confiable a partir de una unica muestra. Se observo un coeficiente de correlacion alto entre: LT y TG (0,96); mientras que para LT y FL fue de -0,42; y para LT y CT de -0,62; lo que indico que el aumento en los lipidos hepaticos ocurrio principalmente en la fraccion TG, y en consecuencia presento una disminucion relativa en la fracciones FL y CT. EnglishThere are difficulties in understanding changes in the distribution of the major lipid fractions in the liver of dairy cows due to the need for invasive techniques for sampling and relatively large quantities of sample needed for analysis. The objective of this research was to integrate a method for extracting total lipid (TL) with the enzymatic determination of its fractions in small biopsies. Liver biopsies from 60 Holstein cows in the transition period (between day 270 of gestation and 20 postpartum) underwent TL extraction using Hexane-Isopropanol mixture. TL obtained was dissolved in hexane, several aliquots of different volumes were used for the enzymatic determination of: triglycerides (TG), phospholipids (PL), total cholesterol (TC) and free fatty acids (FFA). The amount of liver sample used was 49.6 mg ± 18.45mg (Mean ± Standar Deviation). The average was 7.20% TL. The average coefficient of variation (CV) in TL extraction was 7.62%. TL. TG, PL, TC and FFA represented 52.5%; 18.30%; 19.30% and 0.41% respectively of the TL. CV for enzimatic determinations of TG, PL, TC and FFA were: 5.2%; 9.9%; 6.1% and 4.0% respectively, indicating that this method is suitable for determination of lipid fractions in small liver samples. High correlation coefficient was observed between TL and TG (0.96); while for TL and PL was -0.42; and for TL and TC -0.62; It is indicating that the increase in hepatic lipid occurred mainly in the TG fraction and consequently showed a relative decrease in the fractions PL and TC. portuguesHa dificuldades para compreender mudancas na distribuicao das principais fracoes lipidicas no figado de vacas leiteiras, devido a necessidade de tecnicas invasivas para a amostragem e quantidades relativamente grandes de amostra necessarias para analise. O objetivo desta pesquisa foi o de integrar um metodo para extrair lipidios totais (LT) com a determinacao enzimatica de suas fracoes em pequenas biopsias de figado. As biopsias do figado de 60 vacas da raca Holandesa no periodo de transicao (entre o dia 270 de gestacao e 20 pos-parto) foram submetidos a extracao de LT usando mistura hexano-isopropanol. LT obtido foi dissolvido em hexano, foram usadas varias aliquotas de volumes diferentes para a determinacao enzimatica de: trigliceridos (TG), fosfolipidos (FL), colesterol total (CT) e os acidos gordos livres (AGL). A quantidade de amostra utilizada figado foi de 49,6 mg ±18.45mg (Media ± desvio padrao). A media de % de LT foi de 7,20. O coeficiente medio de variacao (CV) na extracao de LT foi 7,62%. TG, FL, CT e AGL representou 52,5%; 18,30%; 19,30% e 0,41%, respectivamente, da LT. CV para determinacao enzimatica de TG, FL, CT e AGL foram: 5,2%; 9,9%; 6,1% e 4,0%, respectivamente, indicando que este metodo e adequado para a determinacao das fraccoes de lipidios em pequenas amostras de figado. Foram observados altos coeficientes de correlacao entre LT e TG (0,96); ao passo que para LT e FL foi -0,42; e para LT e CT foi -0,62; indicando que o aumento no lipidio hepatico ocorre principalmente na fraccao de TG e, consequentemente se apresentou uma diminuicao relativa nas fraccoes FL e CT