双重 PC R检测罗非鱼源无乳链球菌方法的建立

根据罗非鱼源无乳链球菌16S rRNA 基因和sip基因序列，设计、合成2对特异性引物，通过对反应体系和反应条件优化，建立快速检测无乳链球菌的双重PCR方法。该方法扩增无乳链球菌可获得1305 bp和121 bp 2个特异性片段；对6株链球菌属的菌株进行特异性分析，仅无乳链球菌能扩增出16S rRNA 基因和sip基因2条特异性条带，而海豚链球菌无条带检出；经灵敏度试验，可检测到无乳链球菌菌株070717LL的最小量为1.05＆#215;10^2 CFU ；同时，双重PCR可以检测出无乳链球菌菌株070717LL人工感染的罗非鱼脾、脑、肾组织中细菌DNA ，特别是脾脏和肾脏组织的样品检测效果好。结果证明所建立的方法具有快速、特异性强、灵敏度高等优点，适用于对罗非鱼源无乳链球菌病的流行病学调查。