基于Tet-On 3G的IFITM3诱导表达MDCK细胞系的建立及功能分析

利用Tet-On 3G系统构建了含人 IFITM3 基因的真核表达质粒pTRE3G-IFITM3，并将其与调控质粒pLVX-Tet3G共转染犬肾细胞（MDCK），转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选，用多西环素（Dox）对获得的细胞系进行诱导表达鉴定，并进行Dox敏感性分析、IFITM3 + 细胞百分数及定位分析.用含萤光素酶（Luciferase）报告基因的禽流感病毒H5/H7蛋白或VSV G蛋白包裹的假型慢病毒颗粒进行感染实验，检测萤光素酶活性.结果表明，筛选获得了携带人 IFITM3 的MDCK诱导表达细胞系，且IFITM3表达量与Dox剂量和诱导时间相关；确定Dox工作浓度为2.5 μg/mL，诱导12 h时IFITM3 + 细胞数达75%以上，且IFITM3在晚期内体/溶酶体存在分布；假型病毒感染及萤光素酶活性分析表明，IFITM3可显著抑制禽流感病毒H5，H7和VSV G蛋白介导的病毒进入，为深入探究其具体的抑制机制奠定了基础.