BB. Avaliação da obtenção de anticorpos monoclonais murinos por cultivo em batelada alimentada

Objetivo: Avaliar o metodo de cultivo estatico em batelada alimentada durante a expansao dos hibridomas secretores de anticorpos monoclonais (AcMs), a fim de aumentar a concentracao dos anticorpos retidos no sobrenadante de cultura (SNC), necessario durante as etapas downstream do processo de obtencao do bioproduto final. Metodologia: A linhagem de hibridoma PC3-SS2-7A50 que mostrou elevada positividade pelas celulas malignas da prostata (dados obtidos de estudos anteriores) foi cultivada em meio enriquecido (ME). A expansao celular deu-se de maneira progressiva, passando de frascos T de 25 cm2 ate 175 cm2. A diminuicao do SFB adicionado ao meio tambem foi realizada de maneira gradual, passando de 10% ate 2%. A batelada alimentada foi iniciada quando a confluencia celular atingiu 90%, com a adicao diaria durante 5 dias de 2mL de ME+2% SFB. Aliquotas de 1mL do SNC foram coletadas para a determinacao da concentracao de glicose presente no meio, utilizando metodo de cromatografia liquida de alta eficiencia (HPLC) em coluna HPX87H, somado a avaliacao da concentracao de imunoglobulina murina da classe IgG pelo mesmo metodo em coluna de afinidade TKS Gel ProteinTM A. Alem disso, o SNC foi purificado em coluna G de imunoafinidade (HiTrap™ Protein G Sepharose), com posterior quantificacao em espectrofotometro de microplacas, com leitura a 260/280 nm. Resultados e discussao: Atraves das analises em HPLC, notou-se uma reducao da glicose no decorrer do cultivo, o que era esperado, ja que essa fonte de carbono e consumida constantemente pelas celulas. Entretanto a viabilidade celular diminuiu drasticamente no decorrer do cultivo, passando de 81% no dia 0 da batelada alimentada para 7,6% no 5o dia. A concentracao de anticorpos presentes no SNC nao foi significativa, demonstrando que somente a reposicao diaria de um pequeno volume de nutrientes nao e suficiente no aumento da produtividade dos hibridomas na secrecao de anticorpos. Apos etapa de purificacao foi possivel constatar que o melhor eluato, obteve uma concentracao de 0,093mg/ml, que continua sendo consideravelmente baixa. As bandas caracteristicas da cadeia leve e pesada da molecula de IgG tambem puderam ser observadas em tecnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), confirmando o sucesso da etapa de purificacao. Conclusao: Esse estudo teve como objetivo realizar modificacoes na etapa scale-up da obtencao de anticorpos secretados pelos hibridomas, embora o metodo proposto, sendo este, o cultivo em batelada, nao foi satisfatorio na otimizacao da retencao de IgG secretadas no SNC. O cultivo em batelada alimentada nao se diferencia do metodo de producao por batelada, uma vez que o modo de cultivo continua sendo estatico e isso impede o fornecimento de nutrientes e oxigenacao necessarios as celulas hibridas, diminuindo consideravelmente o numero de celulas e a secrecao dos anticorpos.