AVALIAÇÃO DE DOIS MÉTODOS DE TRITURAÇÃO FOLIAR DE Acianthera ciliata (Orchidaceae) PARA EXTRAÇÃO DE DNA

O estabelecimento de protocolo de extracao de DNA de especies vegetais e uma tecnica empregada para a obtencao de um DNA puro e de qualidade. Diante disso, objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo para a extracao de DNA da especie Acianthera ciliata, visando posteriores estudos de diversidade genetica. Foram testados dois metodos de trituracao do tecido foliar, sendo eles: Tampao STE e nitrogenio liquido. Para cada metodo de trituracao foram testadas duas concentracoes de β-mercaptoetanol (0% e 2%). Os dois metodos utilizados, foram eficientes na extracao do DNA genomico de A. ciliata. As amostras extraidas com 0% de β-mercaptoetanol, para os dois metodos, STE e nitrogenio liquido, apresentaram menor quantidade de DNA quando comparado com as amostras extraidas com 2% de β-mercaptoetanol. Os dois primers testados amplificaram regioes do genoma de A. ciliata. Para a extracao de DNA de A. ciliata indica-se a utilizacao de CTAB 5% no tampao de extracao e β-mercaptoetanol a 2%. Os iniciadores ISSR foram eficientes na amplificacao e sao recomendados para estudos de diversidade genetica de A. ciliata.Palavras-chave: diversidade genetica; CTAB; marcadores moleculares; orquideas. EVALUATION OF TWO MACERATION METHODS IN Acianthera ciliata (Orchidaceae) LEAVES FOR DNA EXTRACTION ABSTRACT: The establishment of DNA extraction protocol for plant species is a technique employed to obtain pure and good quality DNA. In this study, we standardized a protocol for the extraction of DNA of the species Acianthera ciliata, aiming studies of genetic diversity subsequently. Two maceration methods for foliar tissue were tested, and they were STE buffer and liquid nitrogen. Two concentrations of β-mercaptoethanol (0% and 2%) were tested for each method. The two methods used were efficient for genomic DNA extraction of A. ciliata. In both methods the samples extracted using 0% of β-mercaptoethanol, they presented lesser amount of DNA than the samples extracted using 2% of β-mercaptoethanol. The two tested primers amplified genomic regions of A. ciliata. For the DNA extraction of A. ciliata, we indicated the use of CTAB 5% in the extraction buffer as well as β-mercaptoethanol to 2%. The ISSR primers were efficient in amplification and thus they are indicated for studies of genetic diversity of A. ciliata.Keywords: genetic diversity; CTAB; molecular markers; orchids.