Optimización de la técnica rsca para la tipificación de los genes MHC-DRB del mono Aotus nancymaae

La investigacion en el diseno de vacunas contra la malaria basadas en peptidos sinteticos modificados, requiere del conocimiento de la estructura y variabilidad de las moleculas del sistema inmune implicadas en la union y presentacion de estos antigenos para inducir respuestas inmunes protectivas, dentro de tales moleculas se encuentran las del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) clase II. Estudios de clonacion y secuenciacion han mostrado un gran polimorfismo en el exon 2 de los genes MHC-DRB del mono Aotus nancymaae, fragmento implicado en la eficacia de las vacunas peptidicas probadas en este modelo animal. Por esto se hace necesaria la implementacion de un metodo confiable y rapido para la tipificacion de los genes MHC-DRB con el fin de evaluar la respuesta de los individuos ante las vacunas. La tecnica RSCA (Reference Strand Mediated Conformational Analyis) se ha usado como una alternativa para la caracterizacion de genes del MHC en humanos, canidos, felinos para aplicaciones clinicas y recientemente en primates no humanos como monos del genero Aotus. En este trabajo se han optimizado las condiciones para la realizacion de RSCA con el empleo de un sistema de separacion de fragmentos por electroforesis capilar en el analizador genetico ABI Prism 310, en el que no se tienen antecedentes de la tipificacion de alelos no humanos. Se obtuvo un panel de muestras control de DNA compuesto por 12 alelos clonados e identificados por secuenciacion del exon 2 de 15 individuos. Se escogio el alelo AonaDRB*W3001 para la construccion de una sonda flluoromarcada (FLR) con las que se determinaron patrones de migracion para cada alelo. Con los parametros electrocineticas de inyeccion determinados (tiempo inyeccion 15 s, voltaje inyeccion 15 kV) y las condiciones de electroforesis (tiempo 16 min, voltaje de corrido 15 kV y temperatura 30 °C) se lograron resolver de manera optima, reproducible y confiable alelos pertenecientes a los linajes AonaDRB1*03 y AonaDRB3*06. Tras el analisis de arboles filogeneticos se propone el alelo humano HLA-DRB1*1101para la elaboracion de una nueva FLR que sirva para caracterizar de forma adecuada individuos que expresen el alelo DRB*W3001 y los que por medio de esta sonda no puedan ser totalmente resueltos. Con este trabajo se contribuyo al conocimiento y caracterizacion del sistema inmune de los primates del genero Aotus en el marco de la busqueda de metodos inmunoprofilacticos efectivos para el control de enfermedades infecciosas, en particular, malaria por P. vivax y P. falciparum.