Extracción optimizada y purificación parcial de invertasa aislada de S. Cerevisiae en puré de durazno

Resumen La extraccion fue realizada a traves de un proceso de autolisis, donde las enzimas degradan las estructuras celulares y liberan el contenido citoplasmatico al medio extracelular. El proceso de autolisis fue realizado en shaker con diferentes velocidades de agitacion (50 - 350 rpm) y concentraciones de bicarbonato de sodio (50 -350 mM NaHCO3) a 40 °C por 24 horas, usando un diseno experimental compuesto central adaptado para dos variables y cinco niveles, asi como una metodologia de superficie de respuest a (MSR) y analisis canonico para definir las condiciones optimas de extraccion de invertasa de S. cerevisiae aislada de pure de durazno (ISc). En la condicion optima de extraccion, se estudio el efecto de la liofilizacion y purificacion en la actividad de la invertasa, usando el metodo colorimetrico del acido 3,5-dinitrosalicilico (DNS) a 490 nm para acompanar su actividad expresada en unidades. Una unidad (U) es definida como 1 mg glucosa.min-1. El valor de proteinas fue cuantificado por el metodo Lowry y la invertasa de levadura comercial (ILC) como testigo. La influencia de la concentracion de NaHCO3 y de la velocidad de agitacion en la extraccion de la enzima invertasa indico efecto lineal, cuadratico e interactivo. El modelo de forma polinomica de segundo orden explico el fenomeno de extraccion de la invertasa con un R2 de 0,80, y con actividad significativamente dependiente de ambas variables. La maxima extraccion fue observada en el punto central experimental (200 mM NaHCO3 y 200 rpm) con una actividad de 14,7 U.mg-1. El punto estacionario es un punto de maxima extraccion, el cual difiere en menos de 10% del punto central experimental. De acuerdo a estas caracteristicas, las optimas condiciones para extraccion de la invertasa de S. cerevisiae aislada de pure de durazno son 200 mM NaHCO3 como agente de autolisis, 200 rpm de agitacion orbital a 40oC durante 24 horas y usando una biomasa de levaduras liofilizadas. El etanol es mas efectivo que la acetona para la recuperacion de la actividad especifica.