铁皮石斛转录因子基因(DoWRKY2)的克隆与表达分析

WRKY转录因子是近年来在植物中发现的新型转录调控因子,调控植物生长发育和代谢等生理过程。本研究从铁皮石斛（Dendrobium officinale）中克隆得到出一个新的WRKY转录因子Do WRKY2（Gen Bank登录号：KF953910）,其全长c DNA为1 309 bp,开放阅读框（ORF）为999 bp,编码一个由332个氨基酸组成的多肽,结构域具有典型的WRKY家族结构特征,有4个β-折叠。生物信息学分析表明,Do WRKY2与海枣（Phoenix dactylifera）的Pd WRKY17相似度最高,为66%;同时,具有特殊的HARF基序以及系统进化树聚类分析都表明,Do WRKY2属于Ⅱd亚族,与At WRKY11和At WRKY17的进化关系最近。蛋白原核表达证实其可以在大肠杆菌（Escherichia coli）中稳定表达。实时荧光定量PCR分析表明,Do WRKY2在铁皮石斛根、茎、叶和类原球茎中均有表达,其中,在叶中表达量最高,相对表达量依次为叶〉类原球茎〉根〉茎;且响应茉莉酸甲酯（Me JA）和壳聚糖（chitosan）诱导,分别在4和1 h,表达量达到最高峰。本研究结果为后续深入研究该基因的功能提供基础材料。