Indução de estresse de retículo endoplasmático como estratégia de quimiossensibilização de melanoma

Embora muitos estudos tenham contribuido para o esclarecimento do processo de tumorigenese em melanomas, ainda nao ha tratamento eficaz para melanomas metastaticos. Esta ineficacia terapeutica pode estar relacionada com a adaptacao e selecao de celulas de melanoma a inducao de estresse de RE. Ultrapassar os niveis sustentados de estresse de RE, interferindo nas vias de adaptacao a este estresse, foi o alvo deste estudo na tentativa de propor uma nova estrategia terapeutica para sensibilizar celulas de melanoma a morte induzida por cisplatina. Mostramos que GADD153, um dos componentes da via de UPR (Unfolded Protein Response) responsavel por induzir apoptose em reposta ao estresse de RE, esta excluida do nucleo em melanomas primarios, metastases ganglionares e viscerais. Este dado sugere que a localizacao citoplasmatica do fator de transcricao GADD153 possa estar envolvida na resposta adaptativa de melanomas ao estresse de RE, uma vez que se sabe que GADD153 se acumula no nucleo em resposta a este estresse. Investigamos se a inducao de estresse de RE seria capaz de induzir a translocacao de GADD153 para o nucleo e resultar na sensibilizacao de celulas de melanoma a morte induzida por cisplatina (CDDP). Realizamos o tratamento de celulas de melanoma (SbCl2, Mel85, SK-MEL- 29, SK-MEL-28 e SK-MEL-147) com tunicamicina (Tuni), indutor classico de estresse de RE, previamente ao tratamento com CDDP. Demonstramos que em todas as linhagens exceto em SK-MEL-29, houve um aumento na porcentagem de celulas hipodiploides (>50%) no tratamento combinado (Tuni>CDDP) comparado ao tratamento com CDDP. As celulas SK-MEL-147 se mostraram mais sensiveis a inducao de estresse de RE e as celulas SK-MEL-29 mais resistentes. Algumas diferencas entre estas linhagens como a expressao de GRP78 de superficie e presenca de oligossacarideos ?1-6 ligados de superficie podem estar relacionadas com esta resposta diferencial ao estresse de RE. Em todas as linhagens...(AU) Melanoma is among the most aggressive malignancies with increasing worldwide incidence and there is no effective treatment for the metastatic disease. The absence of an effective therapy may be due to adaptation and selection of melanoma cells to endoplasmic reticulum (ER) stress. We showed that GADD153, one of the components of the ER stress-mediated apoptosis pathway, was mostly excluded from the nucleus of primary and metastatic melanoma cells compared to nevus cells. These data suggest that the unexpected GADD153 cellular localization could be involved in melanoma cell adaption to ER stress, since GADD153 accumulates in the nucleus during ER stress. Unfolded protein response (UPR) signaling induced in response to ER stress, is a dual process that induces a protective response to restore ER homeostasis or cell death if ER stress is severe or persistent. We investigated if induction of ER stress was a potential strategy to chemosensitize melanoma cells to a second insult by surpassing the adaptive levels to ER stress. We first treated human melanoma cells (SbCl2, SK-MEL-28, Mel85, SK-MEL-29 and SK-MEL-147) with tunicamycin (Tuni), an ER stress inducer, before cisplatin (CDDP) treatment. CDDP is a low cost chemotherapeutic drug currently used in Brazil as a second line for melanoma treatment, especially in youngsters. All cell lines, except SK-MEL-29, demonstrated an >50% increase in the percentage of hypodiploid cells with Tuni>CDDP treatment when compared to CDDP only. The same results were obtained with temozolomide (TMZ), equivalent drug to the active form of dacarbazine, the first line of cytotoxic treatment of melanomas. UPR markers, GRP78 and nuclear translocation of GADD153 were induced by Tuni. Differences between SK-MEL-29 and SK-MEL-147 as cell surface GRP78 and ?1-6 oligossacharides can be related with the differential ER stress sensitization observed in these cells. One of the cellular mechanisms that are regulated by ER stress is autophagy....(AU)