PDLIM5 shRNA质粒构建及其稳定转染SH-SY5Y细胞株的建立

目的构建PDLIM5 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的SH-SY5Y（成神经细胞瘤细胞）细胞系。方法合成PDLIM5基因干扰序列并插到RNAi真核表达载体p GFP-V-RS质粒中,通过酶切和测序进行鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒PDLIM5 shRNA和对照质粒PDLIM5 Scramble经脂质体Lipofectamine 2000介导转染SH-SY5Y细胞,经puromycin持续筛选和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。RT-PCR及Western blot分别检测PDLIM5 mRNA及蛋白表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组获得的干扰真核表达质粒PDLIM5 shRNA与预期完全相同。PDLIM5 shRNA稳定转染SH-SY5Y细胞在荧光显微镜下呈亮绿色。RT-PCR及Western blot检测显示PDLIM5 mRNA及蛋白表达明显下调。结论成功构建PDLIM5 shRNA真核表达载体及其稳定转染SH-SY5Y细胞系,为进一步研究PDLIM5在精神疾病中的功能奠定实验基础。