Construction of recombinant pCDNA3.1(+)-PENK vector

目的 构建人前脑啡肽原基因真核表达载体,为进一步研究内源性脑啡肽的镇痛活性及相关药物研发奠定基础.方法 取新鲜的人脑颞叶皮质组织,用提取RNA的试剂盒提取总RNA,逆转录成cDNA.设计两对引物,用巢式PCR的方法获得人脑啡肽原基因,并将其插入到克隆载体pMD 18-T中,克隆扩增.双酶切真核表达质粒pCDNA3.1(+)及T载体中的目的片段,胶回收重组构建成pCDNA3.1(+)-PENK表达载体.最后限制性酶切鉴定该表达载体.结果 采用巢式RT-PCR技术可以获得人前脑啡肽原基因,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列.凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pCDNA3.1(+)内.结论 成功构建了pCDNA3.1(+)-PENK真核表达质粒.可作为疼痛基因治疗实验研究的有力工具。