Caractérisation de transporteurs membranaires de Plasmodium falciparum en tant que potentiel cibles thérapeutiques

La decouverte de nouveaux agents antipaludiques est primordiale. A travers le monde, les chercheurs se sont focalises sur plusieurs strategies. Les plus developpees sont : soit les tests de molecules issues de bibliotheques chimiques dans une recherche phenotypique (comme le test direct d’agents sur des cultures de parasites in vitro), soit la recherche de nouvelles molecules agissant sur l’activite d’une cible ou d’une voie specifique et essentielle. Cette these est centree sur le second type d’approche. Nous nous sommes interesses aux transporteurs membranaires de P. falciparum. Pour cela, nous exprimons les proteines d’interet dans la levure et nous les purifions. Nous optimisons les tests fonctionnels, dans le but de : a) determiner l’effet des molecules sur les cibles specifiques ; b) tester leur effet sur les cultures d’erythrocytes infectes par P. falciparum in vitro ; c) verifier leur toxicite sur des cellules de mammiferes ; et d) realiser le test des molecules les plus efficaces in vivo dans un modele de paludisme murin. Notre travail actuel est focalise sur l’ATPase6 de P. falciparum (PfATP6) et l’adenylate translocase (PfAdT), deux proteines membranaires essentielles localisees respectivement sur le reticulum endoplasmique et la membrane mitochondriale. Nous exprimons de maniere heterologue PfATP6 dans les membranes de levure, nous purifions la proteine et mesurons une activite ATPase specifique. Nous avons ainsi pu tester une bibliotheque chimique importante et identifier des inhibiteurs specifiques. Ces derniers ont ensuite ete testes pour evaluer leur effet sur les stades erythrocytaires du parasite in vitro et leur cytotoxicite sur des cellules de mammiferes. Pour le transporteur PfAdT, nous procedons comme pour PfATP6, mais nous avons choisi un autre type de test fonctionnel dans lequel la proteine est directement exprimee sur la membrane plasmique d’E. coli. Cela devrait permettre de mesurer le transport d’ATP radiomarque, et l’identification d’inhibiteurs specifiques dont les effets pourront etre evalues sur des cultures de parasites in vitro et dans des essais de cytotoxicite.