TOXINA A DO CLOSTRIDIUM DIFFICILE ALTERA AS CÉLULAS DE PANETH E INIBE A VIA WNT/ β-CATENINA EM MODELO DE ENTERITE

O Clostridium difficile (CD), agente causador de diarreia e colite no homem, destaca-se mundialmente, devido a alta incidencia nos ambientes hospitalares e ao alto impacto para a evolucao do paciente. O CD produz a toxina A (TcdA) e B, duas potentes enterotoxinas, que causam morte e inibem a proliferacao das celulas epiteliais intestinais. A via Wnt-β-catenina quando ativada estimula a proliferacao e diferenciacao de celulas epiteliais. Diante disso, objetivou-se estudar as alteracoes dos produtos das celulas de Paneth e da via wnt/β-catenina na enterite induzida pela TcdA do CD. Para induzir ileite, realizou-se o modelo de alca ileal, isolando 4cm distais do ileo. Em seguida TcdA do CD (grupo toxina A) ou tampao fosfato-salina (PBS, grupo controle) foi administrado no lumen ileal. Apos 4 horas, os animais foram eutanasiados com cetamina e xilazina (100/10 mg/kg) e a alca ileal foi retirada para avaliar os seguintes parâmetros: Analise histopatologica para confirmar a lesao intestinal induzida pela TcdA do CD; expressao de lisozima (marcador de celulas de Paneth), Ki67 (marcador de proliferacao celular), ciclina D1 e E-caderina (ligante de β-catenina) por imunohistoquimica; expressao proteica de β-catenina e LGR5 por Western Blotting; expressao genica de LGR5, cMYC e ciclina D1 por qPCR. Para a analise estatistica, utilizou-se o teste t de Student (nivel de significância de 0,05). TcdA do CD promoveu destruicao das vilosidades intestinais e formacao de intenso infiltrado de celulas inflamatorias, aumentou (p<0,05) a imunomarcacao de lisozima e reduziu (p<0,05) a de Ki67, aumentou a expressao proteica de β-catenina, reduziu (p<0,05) a expressao genica de ciclina D1 e teve uma forte tendencia em reduzir a de LGR5 e diminuiu (p<0,05) a imunomarcacao de ciclina D1 e E-caderina quando comparado ao grupo controle. Conclui-se que TcdA do CD aumenta a producao de lisozima pelas celulas de Paneth e reduz a ativacao da via wnt/β-catenina em modelo experimental de ileite.