Caracterización de mutaciones identificadas en el sistema de la proteína C: Asociación con el riesgo trombótico y estudio de su interacción con otros defectos trombofílicos

INTRODUCCION: La via anticoagulante de la proteina C (PC) es un potente mecanismo fisiologico antitrombotico. Prueba de ello es que la mayoria de los factores de riesgo trombotico de origen genetico conocidos, se localizan en las proteinas que componen esta via o bien en aquellas que modulan su actividad. OBJETIVOS: Nos planteamos caracterizar las principales mutaciones identificadas en los genes que codifican para los dos receptores endoteliales implicados en la activacion de la PC, el receptor endotelial de la PC (EPCR) y la trombomodulina (TM), con la finalidad de conocer como modifican el riesgo de tromboembolismo venoso (TEV) en pacientes consecutivos o en individuos que ya tienen un factor de riesgo trombotico conocido, como son los portadores de la mutacion 20210A del gen de la protrombina (PT), en pacientes con la enfermedad de Behcet y pacientes que han sufrido un infarto de miocardio precoz, patologias en las que la inflamacion juega un papel muy importante, y en las que las acciones antiinflamatorias y citoprotectoras del sistema de la PC pueden jugar un papel relevante. Ademas, nos planteamos estudiar los niveles de glucosilceramida (GlcCer), con actividad anticoagulante, asi como identificar las posibles mutaciones en el gen que codifica para el enzima responsable de la sintesis de la GlcCer, la UGCG, que pudieran influir sobre los niveles de GlcCer y sobre el riesgo trombotico. MATERIAL Y METODOS: Tras la seleccion del grupo de pacientes y controles adecuado a cada estudio, se realizo una extraccion de sangre periferica empleando tubos con diferentes tipos de anticoagulantes segun el ensayo a realizar para la determinacion de los diferentes parametros plasmaticos. La deteccion de las diferentes mutaciones se realizo empleando diferentes tecnicas de biologia molecular. RESULTADOS: En presencia del haplotipo A3 del gen del EPCR aumenta el riesgo de TEV en portadores de la mutacion 20210A del gen de la PT, posiblemente debido a los niveles aumentados de EPCR soluble asociados con este haplotipo. Por otra parte, el alelo 1418T del gen de la TM reduce significativamente el riesgo trombotico. Este efecto protector puede deberse a la asociacion de este alelo con una mayor estabilidad de la TM en la membrana de la celula endotelial. Asi, en el estudio con celulas endoteliales de cordon umbilical humano, se observo que las celulas portadoras del alelo 1418T muestran un elevado nivel de TM en la membrana y un menor nivel en el sobrenadante del cultivo. Los resultados tambien demuestran que niveles reducidos de GlcCer y de PC activada (APC) constituyen un factor de riesgo independiente para el TEV, ademas, la deficiencia combinada de ambos eleva el riesgo individual de cada uno de ellos. El estudio del gen de la UGCG mostro que la insercion de 10 pb en posicion -222 en homocigosis, se asocia con niveles aumentados de GlcCer y con una reduccion del riesgo trombotico. Ademas, individuos portadores de los haplotipos A1 y A3 del gen del EPCR tienen un menor riesgo de infarto de miocardio precoz. Este efecto protector se debe, posiblemente, a los elevados niveles circulantes de APC y EPCR soluble asociados con estos haplotipos. Por ultimo, los resultados preliminares para la enfermedad de Behcet sugieren que los haplotipos A1 y A3 del gen del EPCR tambien parecen disminuir el riesgo de sufrir un TEV en pacientes con esta enfermedad. CONCLUSIONES: Estos resultados reflejan el papel de las principales mutaciones descritas en las proteinas que componen o regulan la via de la PC, mediadas por las diferentes funciones que pueden ejercer tanto la APC como el EPCR soluble. Asi, la APC muestra efectos anticoagulantes y citoprotectores en la trombosis venosa y arterial, mientras que el EPCR soluble puede expresar una funcion procoagulante en la trombosis venosa y una funcion citoprotectora en la trombosis arterial.